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微生物限度檢查法的供試液制備方法有哪些
發布時間:2014-11-06   點擊次數:3708次

     微生物限度檢查法必須用到供試液,那么如何制備供試液呢?可根據供試品的理化特性與生物學特性,采取適宜的方法制備供試液,常用的供試液制備方法如下:
    一、液體供試品
      取供試品10ml,加PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml,混勻,作為1:10的供試液。油劑可加入適量的無菌聚山梨酯80使供試品分散均勻。水溶性液體制劑也可用混合的供試品原液作為供試液。

    二、固體、半固體或黏稠性供試品 
       取供試品10g,加PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml,用勻漿儀或其他適宜的方法,混勻,作為1:10的供試液。必要時加適量的無菌聚山梨酯80,并置水浴中適當加溫使供試品分散均勻。

    三、需用特殊供試液制備方法的供試品
     1、非水溶性供試品
       方法1:取供試品5g(5ml),加入含溶化的(溫度不超過45℃)5g司盤80、3g單硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80無菌混合物的燒杯中,用無菌玻棒攪拌成團后,慢慢加入45℃左右的PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml,邊加邊攪拌,使供試品充分乳化,作為1:20的供試液。
       方法2:取供試品10g,加至含20ml無菌十四烷酸異丙酯(制法見附錄XIII B無菌檢查法中供試品的無菌檢查項下)和無菌玻璃珠的適宜容器中 ,必要時可增加十四烷酸異丙酯的用量,充分振搖,使供試品溶解。然后加入45℃的PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml,振搖5~10分鐘,萃取,靜置使油水明顯分層,取其水層作為1:10的供試液。
     2、膜劑供試品
      取供試品100cm2,剪碎,加50ml或100ml的PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液(必要時可增加稀釋液),浸泡,振搖,作為1:10或1:20的供試液。
     3、腸溶及結腸溶制劑供試品
      取供試品10g ,加pH6.8無菌磷酸鹽緩沖液(用于腸溶制劑)PH7.6無菌磷酸鹽緩沖液(用于結腸溶制劑)至100ml,置45℃水浴中,振搖,使溶解,作為1:10的供試液。
     4、氣霧劑、噴霧劑供試品
      取規定量供試品,置冰凍室冷凍約1小時,取出,迅速消毒供試品開啟部位,用無菌鋼錐在該部位鉆一小孔,放至室溫,并輕輕轉動容器,使拋射劑緩緩全部釋出。用無菌注射器吸出全部藥液,加至適量的PH7.0無菌氯化鈉-蛋

白胨緩沖液(若含非水溶性成分,加適量的無菌聚山梨酯80)中,混勻,取相當于10g或10ml的供試品,再稀釋成1:

10的供試液。
     5、具抑菌活性的供試品
      當供試品有抑菌活性時,應消除供試液的抑菌活性后,再依法檢查。
     (1)培養基稀釋法:取規定量的供試液,至較大量的培養基中,使單位體積內的供試品含量減少,至不含抑菌作用。測定細菌、霉菌及酵母菌的菌數時,取同稀釋級的供試液2ml,每1ml供試液可等量分注多個平皿,傾注瓊脂培養基,混勻,凝固,培養,計數。每1ml供試液所注的平皿中生長的菌數之和即為1ml的菌落數,計算每1ml供試液的平均菌落數,按平皿法計數規則報告菌數;控制菌檢查時,可加大增菌培養基的用量。
     (2)離心沉淀集菌法:取一定量的供試液,3000轉/分離心20分鐘(供試液如有沉淀,先以500轉/分離心5分鐘,取全部上清液再離心),棄去上清液,留底部集菌液約2ml,加稀釋液補至原量。
     (3)薄膜過濾法:見細菌、霉菌及酵母菌計數項下的“薄膜過濾法”。
     (4)中和法:凡含汞、砷或防腐劑等具有抑菌作用的供試品,可用適宜的中和劑或滅活劑消除其抑菌成分。中

和劑或滅活劑可加在所用的稀釋液或培養基中。

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